Isolamento de estirpes de bacillus thuringiensis produtoras de agentes antimicrobianos

Abstract

Bacillus são organismos Gram positivos, formam esporos tolerantes ao calor e a dessecação, possuem grande adaptabilidade quanto às condições fisiológicas (temperatura, pH e salinidade). A maioria das espécies é capaz de produzir várias substâncias que podem ser inibitórias tanto para si quanto para outros microrganismos. Tem-se relatado, desde os anos 50, que várias bactérias do gênero Bacillus tem a capacidade de produzir substâncias com a atividade antimicrobiana, tais como, peptídeos ou bacteriocinas. O objetivo da pesquisa foi identificar estirpes de B. thuringiensis presentes em solos de cerrado produtoras de substâncias com efeito inibitório contra outros microrganismos. Foram coletadas 16 amostras de solo e realizados os procedimentos de isolamento com princípio de diluição de 10 e 100 vezes das amostras utilizando 1 g de solo, aplicação de choque térmico e inoculação em placas de Petri contendo meio ágar LB. As placas foram colocadas na estufa por 48 h a 28 °C. Do total de amostras coletadas, 6 apresentaram crescimento e, a partir destas, foram feitos ensaios de inibição para testar a capacidade de produção de bacteriocinas. O ensaio foi realizado através da adaptação do método de difusão em poços. Após a incubação a 28 °C por 24 h as placas foram observadas quanto a formação de halos, indicando a inibição. Nesse caso, somente duas estirpes apresentaram essa propriedade, sendo então submetidas a novos ensaios de inibição (ensaio com caldo; teste de estabilidade térmica; teste com solvente orgânico) para avaliar a atividade delas. Dessa forma, as estirpes de B. thurinensis possuem a capacidade de produzir toxinas inibindo o crescimento de outras estirpes de B. thuringiensis, até mesmo quando utilizado o caldo, pois estas secretam as toxinas no meio extracelular, sendo inibidas quando aquecidas a 80 °C e ativadas quando dissolvidas em solvente orgânico.